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    實際操作大鼠脂肪間充質干細胞的分離培養

    發布時間:2022-08-18 點擊量:446
      大鼠脂肪間充質干細胞是來源于脂肪組織的干細胞,與其它成體干細胞一樣具有自我更新和多向分化的能力。人和鼠的脂肪組織均可用于分離ADSCs,其中鼠脂肪組織通常取自腹股溝處脂肪墊。
      
      大鼠脂肪間充質干細胞的實驗步驟:
      
      1、10天齡到4周齡大鼠1只,麻醉處死,75%乙醇浸泡消毒3~5min。無菌條件下切開腹股溝皮膚,暴露腹股溝脂肪墊。
      
      2、鈍性剝離脂肪組織,清洗并去除筋膜組織及小血管。將脂肪墊剪碎,轉移至15mL離心管中。
      
      3、加入3~4倍體積的0.1%I型膠原酶溶液,37℃水浴振蕩約20min,直至細胞混合物成乳狀濃稠液體。期間可吹打脂肪組織,輔助消化。
      
      4、250×g,4℃,離心5min。注意離心機預冷至4℃。
      
      5、小心吸去上層油脂,注意不要破壞位于下方的膠狀沉淀。加人5mL*培養基,重懸沉淀,轉移到新的離心管中,再次離心5min。
      
      6、重復洗滌一次,吸去上清。
      
      7、加入8mL*培養基重懸沉淀,轉移至T25培養瓶中,置于37℃,5%CO2溫箱中。
      
      8、待細胞貼壁生長48h后初次觀察、換液。
      
      9、換液時通過棄去培養基,從而去除未貼壁的細胞。
      
      10、以后每兩天更換一次培養基,細胞匯合達80%-90%時,0.25%胰蛋白酶消化,按1:2或1:3比例首次傳代。
      
      大鼠脂肪間充質干細胞注意事項:
      
      1、取材時應將組織清洗干凈,仔細剝離去除血管和筋膜組織。
      
      2、脂肪組織在剪碎的過程中不能研磨,以免破壞細胞。
      
      3、消化完后的組織在離心前把離心機預冷,使細胞更好的與油脂分離。
      
      4、用明膠或者膠原蛋白處理培養皿底壁,有利于細胞的貼壁生長。
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